第二節 體內樣品處理
體內樣品處理的常用方法
(1)去除蛋白質法
釋放與蛋白結合的藥物,測定總濃度,還可保護儀器不被蛋白污染。
①蛋白沉淀法
有機溶劑(按照1:(1~3)比例加入:乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃
強酸(按照1:0.4)比例加入:10%三氯醋酸、7%高氯酸、5%偏磷酸
無機鹽(血樣和無機鹽以1:2混合):飽和硫酸銨、硫酸鈉、鎂鹽、磷酸鹽
②蛋白分解法 測定某些與蛋白結合牢固、且對酸不穩定的藥物時,需用酶解法使蛋白分而釋放出藥物。
(2)綴合物水解法
常用的綴合物水解法包括酸水解和酶水解。
酸水解:簡便、快速、但是專屬性差,并需避免藥物的進一步降解。
酶水解:時間長,酶試劑帶入的粘液蛋白可能污染色譜柱,但是具有選擇性較高的特點,常被優先選用。
(3)萃取分離法
1. 液—液萃取法
大部分藥物有親脂性,在弱極性的有機溶劑中的溶解度大于在水中的溶解度。常用有機溶劑
除去大部分的內源性干擾。所選有機溶劑與水不相容、低毒性、對被測組分有較大溶解度。
常用的有乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷、甲基叔丁基醚等。
優點:操作簡便、選擇性好、去除內源性物質干擾能力強,因為被廣泛使用。
2. 固相萃取法
與高效液相色譜柱類似,利用柱色譜的分離方法,將具有吸附、分配或離子交換性質的的大
比表面積吸附填料作為萃取劑填成小柱,將體內樣品通過小柱,微量待測組分被保留,而內
源性干擾物質大多不被保留而通過,用淋洗溶劑進一步洗去干擾物后,在用洗脫溶劑將藥物
洗脫收集。適用于基質中的酸性、堿性和中性樣品的凈化與分離。
(4)化學衍生化法
根據待測物的化學結構和檢測方法的要求,通過化學衍生物法,特異性的引入功能基團后再
進行分析。通常對藥物分子中含有活潑H的極性基團,如含COOH--、--OH、--NH2、--NH—
和—SH,進行化學衍生化。目的是:改變待測藥物的色譜行為,增強藥物的穩定性,改善
分離能力(手性拆分),提高檢測靈敏度
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